El juego describe las aventuras de dos fontaneros, Mario y Luigi; ambos deben rescatar a la Princesa Peach del Reino Champiñón que fue secuestrada por el rey de los koopas, Bowser. A través de ocho diferentes niveles de juego, los jugadores pueden controlar a uno de los dos hermanos y deben enfrentarse finalmente tras los niveles correspondientes de cada mundo a los monstruos de cada castillo para liberar a Peach. Sus personajes son:
•Mario: su misión es rescatar a Peach. Viste camisa azul y gorra y pantalones rojos, lleva bigote y realiza saltos descomunales. Si coge un hongo se transforma en Super Mario (aumenta de tamaño), si coge una flor, en Fire Mario (su vestimenta se transforma: gorra y pantalones blancos con una camisa roja; puede lanzar bolas de fuego) y si coge una estrella que cambia de color, cambia la música y cambia de color pasando sin ser afectada su vida.
•Luigi: su misión es la misma que la de su hermano Mario aunque aparece como personaje secundario, su vestimenta es igual aunque varía en que en vez de rojo para Luigi es verde.
•Princesa Peach: es la “damisela en apuros”. Vive en un gran castillo custodiado por los fieles Toad. Es secuestrada por Bowser pero solicita la ayuda de su Mario (que según el contexto está enamorado de ella) para que la libere de su enemigo. Viste un vestido pomposa rosa y su arma es una sombrilla.
•Pricesa Daisy: otro personaje femenino ficticio del mundo de Mario. Es una chica bastante ruda por lo que se la considera la menos femenina del grupo. Piel pálida y de ojos grandes y azules, lleva un vestido amarillo y naranja.
•Bowser: es el archienemigo de la serie. Es una tortuga antropomorfa que invade el Reino Champiñón para apoderarse de él.
•Toad: habitante y guardián del Reino Champiñón.
•Goomba: setas de color café que se vencen saltando sobre ellas.
•Koopa Troopa: son seres parecidos a tortugas del ejercito de Browser, hay verdes (van a pie) y rojas (vuelan).
•Lakitu: se asemejan a los Koopa Troopa pero están van sobre una nube lanzando piedas con un tirachinas.
• Planta piraña: enemigo que asciende y desciende de las tuberías.
•Podoboo: bolas de lava que saltan periódicamente.
• Hammer Bros: parecidos a los Koopa Troopa pero lanzan martillo
•Buzzy Beetle: criatura amarilla con caparazón rojo.
• Blooper: similar a un calamar.
•Cheep Cheeps: similares a peces.
